FITC標(biāo)記抗體七大流程
2017-09-07 16:17:13 點(diǎn)擊:
FITC標(biāo)記抗體七大流程:
流程一: 將待交聯(lián)的蛋白(濃度31mg/mL)對(duì)交聯(lián)反應(yīng)液透析三次4℃,至pH=9.0。交聯(lián)反應(yīng)液配制方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加水定容至1 L。
流程二:將FITC溶于DMSO中,濃度為1mg/mL。每次交聯(lián)使用的FITC均應(yīng)新鮮配制,避光。
流程三: 按P:F(蛋白質(zhì):FITC)=1mg:150μg 的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中,邊加邊輕輕晃動(dòng)使其與抗體混合均勻,暗處4℃反應(yīng)8h。
流程四:加入5mol/L的NH4Cl至終濃度50mmol/L,4℃終止反應(yīng)2h。
流程五: 將交聯(lián)物在PBS中透析四次以上,至透析液清亮。
流程六:交聯(lián)物的鑒定
蛋白濃度(mg/mL) = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4
F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ],該值應(yīng)介于2.5~6.5之間。
流程七:FITC交聯(lián)的蛋白應(yīng)置于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中,加入0.1% NaN3、1% BSA,4℃避光保存。
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